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《全国艾滋病检测技术规范》(2020版)导读

归去来兮 2020-7-31 41人围观 技术


文件中关于补充实验的

修订要点


实验室检测的基本原则是先做筛查试验,筛查试验阴性的,直接提供阴性结果报告,筛查试验有反应的样本不能直接给出阳性结果报告,必须进一步做补充试验。请注意:针对科研和项目实施过程中阳性样本反复检测的结果,不在常规监测和检测范畴,可根据科研用途处理结果,不能作为个体诊断反复出具阳性报告,以免给常规监测和报告系统带来混乱。

根据2020版“规范”,补充试验可以选择抗体检测,也可以选择核酸检测。抗体补充试验即抗体确证阳性可以作为诊断HIV感染的依据,核酸检测阳性也可以作为诊断HIV感染的依据。需要注意的是:选择核酸定性检测,其结果为阳性可以直接报告阳性,选择核酸定量检测(即病毒载量)作为诊断依据需要检测值大于等于5000拷贝,5000拷贝以下的需要进行第二次检测或2-4周后随访。

核酸检测(定性和定量)结果的报告:1、核酸定性检测结果:检测结果阳性报告HIV-1核酸阳性,检测结果阴性报告HIV-1核酸阴性。2、病毒载量检测结果:检测结果低于检测线报告低于检测线;>5000拷贝/ml报告检测值;检测线以上但≤5000拷贝/ml建议重新采样检测,临床医生可结合流行病学史、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数或HIV抗体随访检测结果等进行诊断或排除诊断。

疾控实验室的常规工作可利用已经建立的抗体确证实验室条件进行抗体补充试验,必要时可应用核酸试验进行疑难样本和特殊样本的检测。临床医院实验室,如果具备核酸检测条件,推荐优先选择核酸检测,检测结果为阳性即可以作为诊断依据,也可以了解感染者和病人的病毒复制情况,有助于抗病毒治疗效果的判断。


全国艾滋病检测技术规范

新旧版主要变化

全国艾滋病检测技术规范(2020年修订版)与旧版本相比主要修订了以下4个方面:1.新增了检测总流程图、检测样本类型、自我检测及传递检测、输入性抗体核酸检测及HIV-2核酸检测;2.优化了抗体检测流程和抗体确证检测不确定结果的随访要求;3.强化了核酸检测的诊断价值和生物安全;4.完善了新发感染检测策略、核酸检测策略、婴幼儿诊断及各类检测报告。


规范2020修订版8个章节及附件附表中的主要变化在下表中列出。



哪些情况下需要做

艾滋病耐药检测?


HIV耐药是导致艾滋病抗病毒治疗失败的重要原因之一。在2020版《全国艾滋病检测技术规范》继续包含艾滋病耐药检测的内容,关于艾滋病耐药检测我们要了解的哪些内容呢?

01

什么是艾滋病耐药

也称艾滋病病毒(HIV)耐药,是指由HIV遗传变异引起的、对抗病毒药物抑制作用敏感性降低或不敏感的现象。

02

艾滋病耐药如何检测

(1)基因型检测 通过测序或基因芯片杂交等方法,检测HIV基因组中是否有耐药相关突变。基因型检测通常使用测序法,检测流程如下:以HIV的基因组RNA为模板,逆转录PCR扩增目的基因片段,测序获得HIV基因序列,与野生型序列进行比对,判断是否有耐药相关基因突变,再通过耐药数据库的算法关联耐药程度。样本类型可为血浆和干血斑。测序方法通常采用Sanger测序法,随着测序技术的发展,也逐渐开始使用深度测序法。

(2)表型检测 又称体外药敏实验,以50%抑制浓度(IC50)来表示,将待测毒株与野生型毒株的IC50比较,通过倍数改变(Fold change,FC)来评估耐药程度。待测病毒可为直接从感染者体内PBMC中分离培养的病毒,也可为含感染者HIV基因的重组病毒。

一般来说,基因型检测的操作更简单,而且检测周期短,所以在临床上使用得更多,但是表型检测针对复杂突变和新型药物的耐药检测更有优势。

03

基因型耐药检测结果如何看

(1)耐药突变的表示方法:耐药突变是HIV基因核苷酸序列的变化,但采用氨基酸的变化来表示,格式如下:野毒株的氨基酸+氨基酸的位置+突变后的氨基酸,如K103N,是HIV逆转录酶的第103位氨基酸从赖氨酸(K)突变为天冬酰胺(N)。

(2)耐药解释系统:指具有耐药程度算法的数据库,通过算法可将耐药突变结果转换为耐药程度。例如,在应用较广泛的Stanford HIVdb耐药解释系统中,K103N突变的耐药程度为对奈韦拉平(NVP)和依非韦伦(EFV)高度耐药。

04

HIV耐药检测的注意事项

(1)检测时机:由于HIV极易突变,当耐药患者停药或中断治疗时,体内没有抗病毒药物时,野生株的复制优势显现并逐渐积累,最后将检测不出耐药,因此耐药检测的最佳时机为患者正在抗病毒治疗时,或中断治疗一个月内。

(2)警惕样本间交叉污染,检测过程中需要设置空白和阴性对照,并通过序列进化树分析,排除交叉污染。

(3)未检出耐药突变时,不排除比例较低的耐药毒株存在。这是因为当耐药毒株在个体内病毒准种中的比例低于10~20%时,利用Sanger测序法通常检测不到其存在。


来自: 中国疾控艾防中心
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