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史上最强“血常规散点图”解读!

班木芙兰 2020-4-10 466人围观 技术



作者:吴佗


血细胞分析仪 blood cell analyzer,BCA 作为外周血常规检测仪器,可以对一定体积全血内的血细胞进行自动分析,主要包括血细胞计数与分类、血红蛋白测定及相关参数计算。

血细胞分析仪的更新换代一直紧跟生物科技的进展,由三分群功能发展至五分群,其检测原理从最经典的电阻抗 Coulter 技术,逐渐拓展出体积电导光散射 VCS 技术、多角度偏振光散射 MAPSS 技术、双鞘流动力连续系统 DHSS 技术,及依托激光散射联合荧光染色或细胞化学染色的流式技术。

就目前而言,流式激光散射联合荧光染色技术对于血细胞的分析不论是在参数方面还是评价方面均有极大优势,因此,以此技术为核心生产力的希森美康 Sysmex 公司其产品广受好评。

而伴随着仪器、技术的发展,对于检验工作人员的知识储备也要求愈高。在日常工作中,如果能够从血常规结果散点图/直方图中第一时间发现问题,将极大程度节省结果的分析、审核时间,提高工作效率。


01

基本原理



在鞘流作用下,以波长633nm激光照射细胞,收集三类信号:

① 前向散射光FSC反映细胞体积大小
② 侧向散射光SSC反映细胞内部构造复杂程度
③ 侧向荧光SFL反映细胞内核酸及细胞器种类和多少

通过对这三类信号进行数字演算,将样本中的细胞进行分类、计数,并提示异常/幼稚细胞的存在。

02

白细胞检测



分为WNR、WDF、WPC通道。

◍ WNR通道

进行白细胞的计数、嗜碱性粒细胞和有核红细胞的分类计数。

通过溶血剂破坏红细胞,白细胞胞膜轻微受损,利用FSC获得白细胞形态差异,将嗜碱性粒细胞区别于其他白细胞进行计数;通过荧光染色,利用SFL检出有核红细胞并进行计数。


对所测细胞进行统计,以SFL为横坐标,以FSC为纵坐标,得到WNR散点图。

* WNR通道散点图

Debris:影细胞/细胞碎片;PLT Clumps:血小板凝集;WBC:除外BASO的其他白细胞;NRBC:有核红细胞;BASO:嗜碱性粒细胞。

◍ WDF通道

进行白细胞的计数,分类为淋巴、单核、中性粒、嗜酸性粒细胞,并提示异常/幼稚细胞的检出。

通过溶血剂破坏红细胞,白细胞胞膜轻微受损,利用SSC获得不同白细胞内部构造复杂程度的差异;通过荧光染色,利用SFL获得不同白细胞核酸及细胞器种类和多少的差异,从而对各类白细胞进行区别计数。

对所测细胞进行统计,以SSC为横坐标,以SFL为纵坐标,得到WDF散点图。

* WDF通道散点图

Debris:影细胞/细胞碎片;NRBC:有核红细胞;LYMPH:淋巴细胞;Abnormal lymph Blast:异常淋巴细胞/原幼淋巴细胞;Atypical lymph:不典型淋巴细胞/异型淋巴细胞;MONO:单核细胞;Blast:原始细胞;NEUT+BASO:中性粒细胞及嗜碱性粒细胞;Left shift:核左移;IG:幼稚粒细胞;EO:嗜酸性粒细胞。

◍ WPC通道

检出原始细胞、淋巴细胞系的异常细胞。

在溶血及荧光染色反应中,原始或其他异常细胞因性质不同于正常细胞,在FSC、SSC、SFL信号方面都会有差异性表现。


对所测细胞进行统计,以SSC为横坐标,以SFL为纵坐标,得到WPC散点图。

* WPC通道散点图

WBC:白细胞;Blast:原始细胞;Abnormal lymph:异常淋巴细胞。

另可以SSC为横坐标,以FSC为纵坐标,得到WPC散点图。

* WPC通道散点图

WBC:白细胞;Blast:原始细胞;Abnormal lymph:异常淋巴细胞。


03

红细胞、血小板检测



有RBC/PLT、RET、PLT-F通道。

◍ RBC/PLT通道

鞘流电阻抗法进行分析:

在鞘液包绕下,细胞单个排列通过检测器小孔,因细胞相对电解质溶液为不良导体,故其通过时会产生脉冲信号,脉冲信号的数量反映细胞数量,脉冲信号的强度反映细胞体积


对不同大小的细胞频数进行统计,以细胞体积为横坐标,以细胞数量为纵坐标,得到RBC/PLT直方图。

* RBC/PLT通道直方图

直方图的观察要点:

① 峰的位置反映主细胞群体积
② 峰的高度反映主细胞群数量
③ 峰底宽度反映主细胞群体积均一性
④ 峰的头尾处异常提示干扰因素
异常峰提示异常细胞群

仪器在25-250fL范围内分析RBC:正常RBC集中于50-150fL区域,呈正态分布。右侧120-200fL区域为大红细胞/网织红细胞等;左侧30fL处有一小细胞峰,放大后即PLT直方图。

仪器在2-30fL范围内分析PLT:正常PLT集中于2-15fL区域,呈左偏态分布。低界标线LD浮动范围2-6fL用以排除噪音干扰;高界标线UD浮动范围12-30fL用以排除小红细胞、红细胞碎片等干扰;固定鉴别线12fL用以判断大血小板比率。

RDW-SD:假设峰值高度为100%,在20%频数水平上的体积差值即RDW-SD,单位fL;RDW-CV:L1~L2在总分布区域中的出现频数为68.26%,则RDW-CV=(L2-L1)/(L2+L1),单位%;PDW:同RDW-SD。

◍ RET通道

通过荧光染色区分成熟红细胞与网织红细胞,并对后者进行分类。

对所测细胞进行统计,以SFL为横坐标,以FSC为纵坐标,得到RET散点图

* RET通道散点图

PLT:血小板;RBC Fragments:红细胞碎片;RBC:红细胞;RET:网织红细胞;LFR:低荧光强度网织红细胞;MFR:中荧光强度网织红细胞;HFR:高荧光强度网织红细胞。

◍ PLT-F通道

PLT可通过三个通道进行检测:RBC/PLT通道测得PLT-I,RET通道测得PLT-O,PLT-F通道测得PLT-F,以PLT-F排除PLT-I通道小红细胞/红细胞碎片的干扰,从而对PLT数值进行修正

通过荧光染色区分血小板与其他血细胞,同时检出幼稚血小板。


对所测细胞进行统计,以SFL为横坐标,以FSC为纵坐标,得到PLT-F散点图。

* PLT-F通道散点图

Debris/RBC Fragments:影细胞/红细胞碎片;PLT:血小板;IPF:未成熟血小板;RBC:红细胞;WBC:白细胞。


04

示例



当某样本血常规结果异常时,以报警信息Flag结合散点图/直方图表现,可对该血样进行一定程度的分析和预判。

◍ IP信息

◍ 正常样本检测散点图/直方图


以下例图由上海市松江区中心医院夏万宝老师提供。

◍ 急性髓细胞白血病部分分化型AML-M2病例

WBC Flags WBC Abn Scattergram 白细胞散点图异常;Neutrophilia 中性粒细胞增多;Lymphocytosis 淋巴细胞增多;Monocytosis 单核细胞增多;Leukocytosis 白细胞增多;IG Present 幼稚粒细胞增多;Blasts? 原始细胞?Left Shift? 核左移?
RBC Flag Anemia 贫血
WDF散点图 大量异常细胞:原始细胞?
WNR散点图 异常细胞群:有核红细胞?白细胞群位置偏右/荧光强度高:幼稚白细胞?
WPC散点图 少量异常细胞:髓系原始细胞?

◍ 急性早幼粒细胞白血病AML-M3病例

WBC Flags WBC Abn Scattergram 白细胞散点图异常;Neutrophilia 中性粒细胞增多;Lymphocytosis 淋巴细胞增多;Monocytosis 单核细胞增多;Leukocytosis 白细胞增多;IG Present 幼稚粒细胞增多;Blasts? 原始细胞?Left Shift? 核左移?
RBC Flags Anemia 贫血;RET Abn Scattergram 网织红细胞散点图异常
PLT Flags PLT Abn Distribution 血小板直方图异常;Thrombocytopenia 血小板减少
WDF散点图 大量异常细胞:原始细胞?
WNR散点图 异常细胞群:有核红细胞?白细胞群位置偏右/荧光强度高:幼稚白细胞?
PLT直方图 曲线异常:血小板减少?形态异常?

◍ 急性单核细胞白血病AML-M5病例

WBC Flags WBC Abn Scattergram 白细胞散点图异常;Lymphocytosis 淋巴细胞增多;Monocytosis 单核细胞增多;Eosinophilia 嗜酸性粒细胞增多;Basophilia 嗜碱性粒细胞增多;Leukocytosis 白细胞增多;IG Present 幼稚粒细胞增多;Blasts? 原始细胞?Left Shift? 核左移?
PLT Flag Thrombocytopenia 血小板减少
WDF散点图 大量异常细胞:原始细胞?
WNR散点图 少量异常细胞:有核红细胞?白细胞群位置偏右/荧光强度高:幼稚白细胞?
WPC散点图 异常细胞群:髓系原始细胞?

◍ 慢性粒细胞白血病CML病例

WBC Flags WBC Abn Scattergram 白细胞散点图异常;Neutrophilia 中性粒细胞增多;Lymphocytosis 淋巴细胞增多;Monocytosis 单核细胞增多;Eosinophilia 嗜酸性粒细胞增多;Basophilia 嗜碱性粒细胞增多;Leukocytosis 白细胞增多;NRBC Present 有核红细胞增多;IG Present 幼稚粒细胞增多;Left Shift? 核左移?
WDF散点图 大量异常细胞:原始细胞?幼稚粒细胞?嗜酸性粒细胞增多?
WNR散点图 异常细胞群:有核红细胞?嗜碱性粒细胞增多?白细胞群位置偏右/荧光强度高:幼稚白细胞?

◍ 淋巴瘤病例

WBC Flags WBC Abn Scattergram 白细胞散点图异常;Lymphocytosis 淋巴细胞增多;Monocytosis 单核细胞增多;Leukocytosis 白细胞增多;IG Present 幼稚粒细胞增多;Abn Lympho? 异常淋巴细胞?Atypical Lympho? 异型淋巴细胞?
WDF散点图 大量异常细胞:异常淋巴细胞?
WPC散点图 异常细胞群:异常淋巴细胞?

◍ 骨髓增生异常综合征MDS病例

WBC Flags Monocytosis 单核细胞增多;IG Present 幼稚粒细胞增多;Blasts? 原始细胞?
RBC Flag Anemia 贫血
PLT Flags PLT Abn Distribution 血小板直方图异常;Thrombocytopenia 血小板减少
WDF散点图 异常细胞:原始细胞?幼稚粒细胞?中性粒细胞位置左移/内部复杂程度减低:颗粒缺乏?
WNR散点图 白细胞群位置偏右/荧光强度高:幼稚白细胞?
PLT直方图 曲线异常:血小板减少?形态异常?


综上所述,血细胞分析仪散点图/直方图对于外周血细胞数量甚至某些细胞形态的异常均有良好的提示,可以指导、辅助检验结果的审核分析,对检验工作有较大帮助,但须注意实际工作中血细胞形态多变,血常规图形表现缺乏特异性,仅可作为参考,切不可替代人工镜检

来源:细胞学者

编辑:Bling  审校:Rose


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