临床沟通必备微生物培养与药敏流程详述及常见问题解答

微生物流程详述

微生物培养、药敏试验的流程及意义

• 微生物培养及药敏试验的总述

微生物培养就是使用体外试验的方法检测可能导致感染的病原菌，并给以药敏结果，为临床医生针对某一特定的临床感染提供依据。而药敏试验则是承接微生物培养的一项工作，即对于培养得到的病原菌进行体外试验检测细菌对于抗菌药物的耐药性，来预测抗菌药物的临床治疗效果，从而为临床医生提供选用抗菌药物的依据来治疗感染。

对于检测到的可能的致病菌进行药敏试验时选择的药物是参照美国的CLSI推荐的标准制定的。尤其，使用全自动微生物分析仪进行药敏试验时有固定的药敏组合，不是人为可以随意添加或减少的。

（一） 微生物的培养和药敏试验的流程基本为：

① 标本进行处理（不是所有的标本都需要处理）；

② 将标本接种于不同的培养皿中在不同条件的培养箱中进行培养（不同的标本所含菌的种类不同，不同菌的生长条件不同，因此需要接种于不同的培养皿中）；

③ 24h后观察培养皿中细菌的生长情况：

a.此时若无细菌培养，继续放回培养箱中培养24h，若仍然无细菌生长则判定为阴性结果，因此阴性结果出具的时间为48h以后。

b.若有细菌生长，要根据形态和气味等对细菌进行初步的判定，若能判定出细菌的种类，则进行相应的药敏试验。

贴有药敏片的培养皿在培养箱中培养24h后进行药敏结果的解读，然后报告结果，这种微生物培养及药敏结果报告出具的时间就是48h以后。

由于不同的细菌的生长的速度不同，有些细菌在培养24h后不能完全判定结果甚者24h培养后无法观察到明显的细菌生长的则需要继续培养24h，即连续培养48h后同样根据菌落的形态、气味等来观察判定细菌的种类然后进行药敏试验。这种微生物培养和药敏试验结果出具需要72h以后。

而血液、骨髓等标本则是利用不同于上述培养方式的方法进行培养。它有专门的培养瓶和仪器。这种仪器会自动监测培养瓶中的变化来判定有无细菌生长，若有细菌生长仪器会发出警报。在培养5天内任何时间发出警报的培养瓶都要抽取瓶中的物质在培养皿中进行接种培养，同样在菌种鉴定后进行药敏试验；若在培养5天内不发出警报的培养瓶则视为阴性结果。因此血培养出具结果的时间为5～7天。

菌落的鉴定需要有雄厚的工作经验和熟练的相关基础知识。常规鉴定的方法有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应。在微生物室学习时发现，很多时候在不太确定细菌的种类时，检验人员也会结合理化特性来判定细菌种类。

（二） 革兰氏染色、应用及意义

由于微生物的生长有时间限定，因此微生物培养和药敏试验没有急查的说法。最快的结果也只能是通过涂片来判定有无细菌生长和细菌染色后的颜色和形态，来给临床医生的用药提供依据。

革兰氏阳性菌和阴性菌因为细胞壁的结构不同，在革兰氏染色时染成不同的颜色。革兰氏阳性菌显示紫色、革兰氏阴性菌显红色或粉色。由于细胞壁的结构不同，导致这两类细菌在染色性、抗原性、毒性、对某些药物的敏感性等方面均有较大差异。

一般情况下，大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们差生内毒素，靠内毒素使人致病。在治疗上，大多数革兰氏阳性菌对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感），革兰氏阴性菌对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中德流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感），而对链霉素、氯霉素等敏感。所以区分病原菌是G+、G-，在选择抗菌药物方面意义重大。

常见的G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等；常见的G-：大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、流感（嗜血）杆菌、卡他（摩拉）菌、不动杆菌属、那尔森菌属、嗜肺军团菌、百日咳杆菌、副百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、霍乱弧菌、副溶血性杆菌、类志贺吡邻单胞菌等。

涂片的原理就是将标本固定于玻璃片上，并进行革兰氏染色，然后在显微镜下观察染色情况和细菌的形态。是若有细菌生长，也只能判定是革兰氏阳性菌或者是革兰氏阴性菌。涂片是一种粗略的、快速的细菌鉴定的途径。经常被辅助用于细菌种类的鉴定，虽然通过这种方法无法给予具体的细菌的种类及药物耐药性。但是对于临床医生用药可以提供一个大致的方向。

微生物标本有带菌体液和无菌体液两种类型。带菌体液包括：痰、鼻咽拭子、尿液、粪便等；无菌体液包括血液、骨髓、脑脊液、关节腔积液、心包积液、胸腔积液、鞘膜积液、胸腹水等。在排除采集标本或其他操作过程污染之后从患者血液等无菌体液中检出的细菌一般都应视为病原菌。

• 药敏试验结果的解读

药敏试验为临床抗菌药物的选择有指导意义，正确地解读药敏报告单将会帮助我们更好地利用药敏结果来选择合理的药物及合适的剂量等。 不同细菌进行药敏试验时选用的抗菌药物是根据美国CLSI标准来配备的。不同的药物会使用不同的药物组合，但总体上该标准将所选药物分为以下几类：

--A组：首选，常规试验和报告

--B组：首选抗生素，在下列情况下选择使用

–细菌对A组抗生素耐药

–病人对A组抗生素过敏

–严重感染或多部位、多种细菌混合感染

–控制传染病流行

--C组：备选抗生素，在下列情况下使用

–对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染

–对不常见菌感染的治疗

–控制传染病的流行

--U组：包含某些仅用于或首选治疗泌尿道感染的抗菌药物

因此，同一张药敏报告单中包含的药物有A组、B组甚至可以有C组和U组；不同的标本检出同样的细菌，药敏报告单中的药物也不会相同。

关于药敏报告单的解读，常见的问题及答案如下：

1、 我们想用的药物在药敏试验中没有做？

① 能是天然耐药 ②可能是药物的敏感性被其他药物所预报

2.为什么有的菌报告很多种药物，有的仅报告几种药物？ 报告的药物种类根据细菌种类的不同而有所不同，如铜绿假单胞菌报告的药物较多，而嗜麦芽窄食单胞菌报告的药敏较少。 3、是否能将所用的药都做药敏试验?

①没有必要：通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性

②没有可能：不是所用药物都可以做药敏试验（需要药物在体外稳定，需要有操作标准和解释标准）

4、在药敏试验报告中MIC越小的抗菌药物效果越好吗？如何根据MIC联合用药？

①感染菌对同一种药物的MIC越小，效果越好；

② 同种抗菌药物之间MIC无可比性；

③目前很多仪器报告的是检测折点，而不是真正的MIC。

5、培养阳性的细菌都需要用抗菌药物治疗吗？

①不是的；

③ 培养阳性?感染，可能为污染（血培养），可能为定植（痰培养）；

③任何结果必须结合临床情况进行评价（很重要）； ④感染部位的清创、引流、换药比使用抗菌药物更加重要； ⑤改善患者全身情况：器官功能支持，纠正酸碱平衡，电解质紊乱，低蛋白血症，高血糖等。

6、选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治疗无效？

①体外药敏试验只能预测体内治疗效果，并不等同；一般来说，耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效；

②可能不是真正的致病菌（污染或定植菌）；

③细菌本身因素（如诱导耐药，生物被膜）；

④ 感染部位与药代动力学因素；

⑤细菌的MIC，给药剂量和用药方式；

⑤ 敏试验药物中有些药物单独使用无效，但可以与其他药物联合用药；

⑦药物剂型及生物利用度（纯品、商品）。

7、涂片镜检结果与培养结果不吻合？

①涂片镜检是报告所有检见的细菌，而培养的目的是检出致病菌,因此会产生涂片和培养结果不一致的情况； 
②一些苛氧菌需在特殊的环境或培养基上才能生长，因此可能在培养后才能得到。

8、取的明显就是脓液标本，为何鉴定报告为无菌生长？

①我们做的是有氧培养，脓液可能为厌氧菌感染。

②可能细菌被大量的中性粒细胞吞噬。

9、鉴定结果明明写着四联球菌、革兰氏阳性杆菌，为何没有药敏结果？

①四联球菌为微球菌，一般不引起人体致病，为非致病菌，故考虑污染可能；

②药敏结果参照CLSI标准，目前革兰氏阳性菌没有参照标准，故暂不能做药敏试验，若需治疗可参照阳性球菌用药。

10、一般培养不是三天出结果吗，今天第四天了怎么还没出来？

一般培养经48小时后，即第三天出报告，若需分离致病菌的则第四天出报告。

11、今天的培养结果怎么与前天的不一样？ ①取材是否规范。 ②痰标本，有时选优势菌做，就可能导致两次不一样。

12.明显稀便，培养结果为何正常？

①大便普通培养，通常只能鉴定志贺菌、沙门菌感染，致病性大肠杆菌我们没有鉴定血清； ②怀疑霍乱时，需开霍乱弧菌培养；

④ 能病毒感染(轮状病毒)。