血栓分子标志物检测及临床应用

人体内出凝血系统是一个非常庞大且繁杂的系统，机体通过凝血、纤溶、血小板、内皮四个系统的参与时刻维持着动态平衡。促凝与抗凝活性的失衡将直接导致血栓性疾病与出血性疾病的发生，且血栓性疾病更常见。目前实验室凝血常规检测项目，如PT、APTT、TT、Fbg、D-二聚体、FDP、抗凝血酶、凝血因子等已涵盖凝血、纤溶等系统，但都属于在血栓形成后的被动检测、晚期筛查项目，对血栓前状态、Pre-DIC等疾病不敏感，同时对于溶栓治疗监测不能在第一时间反馈效果。

血栓分子标志物（TAT、PIC、TM、tPAI-C）与D-二聚体、FDP联合检测，可在早期更加敏感、可靠的向临床反馈血栓的发生与形成、术后血栓与出血情况的监控、Pre-DIC的状态、溶栓治疗的效果、血管内皮系统损伤等情况。

注：TAT：凝血酶抗凝血酶复合物；PIC：纤溶酶-抗纤溶酶复合物；TM：血栓调节蛋白；t-PAIC：组织型纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活抑制复合物；AT：抗凝血酶；PC：蛋白C；PS：蛋白S；APC：活化的蛋白C；FV/FⅧ：凝血因子V/Ⅷ；α2-PI：ａ２-纤溶酶激活抑制物；t-PA：组织型纤溶酶原激活物；PAI：纤溶酶激活抑制物；FDP／DD：纤维蛋白（原） 降解产物／D-二聚体；PAF：血小板活化因子；vWF：Vonwilebrand因子

图1：凝血标志物活化示意图

凝血酶生成是静脉血栓形成的关键环节，它作用于纤维蛋白原使其转变为纤维蛋白而形成血栓。但凝血酶在血液中半衰期不到1分钟，会很快被抗凝物质中和，因此直接检测凝血酶非常困难。而作为凝血酶与抗凝血酶1:1结合形成的复合物，TAT可作为凝血酶生成的分子标志物，直接证实凝血系统的活化。

正常参考区间：0-4.0ng/mL

TAT升高见于：

1) DIC，DIC前期状态

2) 深静脉血栓（DVT），肺栓塞（PE）

3) 某些心房颤动，与二尖瓣狭窄相关的心房颤动

4) 其他凝血系统激活状态

当凝血活化，纤维蛋白形成后可以激活组织型纤溶酶原激活剂（t-PA），活化的t-PA进一步激活纤溶酶原转化为纤溶酶，后者降解纤维蛋白形成D-二聚体。组织型纤溶酶原激活剂抑制剂PAI-1是t-PA的生理性抑制剂，二者1:1形成复合物即tPAI-C后，t-PA激活纤溶酶原的活性被抑制，进而抑制纤维蛋白降解。tPAI-C水平与t-PA浓度及血管内皮损伤程度呈正相关，是评估两者的直接标志物。

正常参考区间：男性：0-17ng/mL

              女性：0-10.5ng/mL

tPAI-C升高见于：

1) DIC　

2) 血管内皮损伤

3) 各种动脉和静脉血栓形成（DVT、急性心肌梗死等）

纤溶酶是纤溶系统的重要组成部分，活化的纤溶酶半衰期极短，仅仅几秒钟，体内不易测定，纤溶酶生成后迅速与α2纤溶酶抑制剂1:1结合形成复合物，纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物（PIC）的出现直接反应纤溶酶的生成，可用于纤溶类疾病的辅助诊断及疗效观察。

正常参考区间：0-0.8ug/mL

PIC升高见于：

1) DIC, DIC前期状态

2) DVT，PE

3) 在溶栓治疗的给药过程中（t-PA，尿激酶）

4) 其他纤溶激活状态

血栓调节蛋白（TM）是1981年首次由Esmon等确认并提出的一种存在于细胞膜表面的跨膜糖蛋白，TM大多出现在动脉、静脉、毛细血管和淋巴管的内皮细胞表面，可以辅助凝血酶激活蛋白C系统产生抗凝效果。当内皮细胞发生病变或受损时，常引起TM的表达、分泌异常、释放入血，从而引起TM含量变化，因此可作为内皮细胞损伤的标志物。

正常参考区间：3.8-13.3TU/mL

TM升高见于：

1) 自身免疫性疾病：SLE等

2) DIC

3) 急性呼吸窘迫综合征（ARDS）

4) 血管内皮损伤

TAT对于DIC、DVT等引起高度凝血激活的病理状态，是敏感标志物，已列入2014年日本血栓止血学会暂定的DIC诊断标准。但对于进行华法林等抗凝治疗的患者，无法发现低凝水平的血栓形成，因此不宜作为血栓监测指标，而是作为抗凝效果的指标。tPAI-C和PIC代表纤溶系统活化，具有很好的血栓诊断意义，原因可能在于其存在反映了纤维蛋白的生成（血栓形成），因此可以成为静脉血栓形成良好的监测指标。而纤溶的下游产物FDP和D-二聚体易受到底物量、血栓部位、血循环、代谢等因素影响，特异性较低。

以TAT为例，本检测采用化学发光免疫分析两步法定量检测凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物（TAT）。生物素化凝血酶单克隆抗体（小鼠）与被检样本中的TAT发生特异性反应，再与链霉亲和素磁微粒结合。去除未反应物质后，加入碱性磷酸酶（ALP）标记的抗凝血酶Ⅲ单克隆抗体（小鼠）与磁微粒上的TAT 发生特异性反应。再次去除未反应物质后， 添加发光底物经磁微粒上的ALP 分解并发光，测定其发光强度。发光强度随被检样本中TAT浓度的增加而增加。如图2。

图2.TAT检测原理

参考文献

1.阮长耿.出血与血栓性疾病的诊断和治疗进展.临床血液学杂志,2010,23(1):1-4.

2.Su EP, Chatzoudis N, Sioros V, et al. Markers of thrombin generation during resurfacing and noncemented total hip arthroplasty: a pilot study[J]. Clin Orthop Relat Res, 2011,469(2):535-540. DOI:10.1007/s11999-010-1659-z.

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